PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫,它是利用DNA聚合酶在短時(shí)間內(nèi)將目標(biāo)DNA序列從一個(gè)拷貝擴(kuò)增到數(shù)百萬個(gè)拷貝的一種方法。具體而言,將下述1~3的一系列反應(yīng)稱為“循環(huán)",通過重復(fù)25~35個(gè)循環(huán),以指數(shù)方式合成目標(biāo)DNA的拷貝。
變性:加熱雙鏈DNA模板以分離DNA鏈
退火:將稱為引物的短 DNA 分子附著到目標(biāo) DNA 的相鄰區(qū)域
延伸:DNA 聚合酶合成模板的互補(bǔ)鏈,從每個(gè)引物開始并向 3' 端移動。
熱循環(huán)儀是一種用于自動控制 PCR 中溫度循環(huán)和孵育時(shí)間的設(shè)備。PCR 管專為熱循環(huán)儀而制造。為了選擇正確的 PCR 管,有必要了解您所使用的熱循環(huán)儀的規(guī)格。
此外,PCR有標(biāo)準(zhǔn)PCR、梯度PCR、實(shí)時(shí)PCR、qPCR等多種類型,因此需要根據(jù)目的選擇合適的PCR。同時(shí),根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型適當(dāng)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)設(shè)備和試劑也很重要。
通常使用的材料是聚丙烯。這是因?yàn)榫郾┚哂谢瘜W(xué)惰性,可以承受熱循環(huán)過程中溫度的快速變化。此外,管壁制造得薄而均勻,以增強(qiáng)熱循環(huán)儀的傳熱。
此外,我們還非常謹(jǐn)慎地確保我們的產(chǎn)品不含灰塵、核酸內(nèi)切酶、熱原、DNA、潤滑劑、染料、重金屬、填料和其他雜質(zhì)。這是因?yàn)?,如果產(chǎn)品在制造過程中受到污染,灰塵顆??赡軙埩舨⒁种芇CR,或者DNA片段可能作為非特異性擴(kuò)增的模板,從而降低實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。
該結(jié)構(gòu)由容納樣品的管部分和蓋部分組成。有一根管分開的單管型,也有多管連接的8管型和12管型。
瓶蓋形狀有平頂和圓頂兩種,又可分為兩種類型:一瓶蓋連接一根管子,以及多瓶蓋與管子連接和分離的類型。
管件有兩種類型:一種是正常高度(標(biāo)準(zhǔn)輪廓),一種是低高度(低輪廓)。除了透明透明型外,還有白色型。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型選擇熱循環(huán)儀并使用與您所使用的熱循環(huán)儀兼容的熱循環(huán)儀非常重要。例如,透明管(透明型)可以很容易檢查內(nèi)容物,但白色管具有防止熒光折射和擴(kuò)散到管外的作用,增加qPCR的靈敏度。
圓頂蓋可以快速傳遞熱循環(huán)儀的熱量,而平蓋的優(yōu)點(diǎn)是易于用記號筆標(biāo)記,并且在采集樣品時(shí)易于用針刺穿。
薄型管的高度較低,最大限度地減少了反應(yīng)容器內(nèi)的空間面積,從而減少了蒸發(fā)的影響,并且比普通管具有更高的導(dǎo)熱率。薄型管有時(shí)被稱為快速管,因?yàn)樗鼈兣c快速熱塊兼容。
另外,PCR管適用于中小型PCR實(shí)驗(yàn),因此如果規(guī)模較大,則適合使用PCR板。
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